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  NanoTemper Technologies公司Prometheus NT.48蛋白質(zhì)穩(wěn)定檢測，采用nanoDSF技術(shù)，測量蛋白穩(wěn)定性，具有超高分辨率。
 

 
       nanoDSF是一種先進(jìn)的差示掃描熒光技術(shù)，具有超高分辨率，利用蛋白中色氨酸和酪氨酸自發(fā)熒光檢測其穩(wěn)定性。它廣泛應(yīng)用于抗體工程、膜蛋白研究、制劑和質(zhì)量控制等領(lǐng)域。采用 nanoDSF 技術(shù)，簡單、快速、準(zhǔn)確地分析蛋白折疊和穩(wěn)定性。

       完全無標(biāo)記，僅通過檢測色氨酸和酪氨酸自發(fā)熒光的變化即可分析蛋白的化學(xué)和熱穩(wěn)定性?；跓o可比擬的掃描速度和數(shù)據(jù)點(diǎn)密度，NanoTemper的雙UV技術(shù)可動態(tài)檢測熒光變化，獲得具有超高分辨率的去折疊曲線。數(shù)據(jù)不受樣品聚集的影響，甚至可以檢測到瞬間的去折疊信號。

      由于無需外加熒光染料，蛋白樣品測試不受緩沖液的限制，其濃度可上達(dá)250 mg/ml，下至5 ug/ml。因此適用于研究含去垢劑的膜蛋白和高濃度的抗體制劑。
背向反射法測定蛋白聚集

      Prometheus NT.48 (PR NT.48) 可在 15 - 95°C 范圍內(nèi)同時(shí)持續(xù)加熱處理多達(dá) 48 個(gè)樣品，升溫速率可在 0.1 - 7°C/min 按需調(diào)整，并同時(shí)收集樣品的熒光和背向反射信號。因此，樣品的聚集起始溫度和對應(yīng)的熔融溫度可在多達(dá) 48 種不同的條件下同時(shí)測定。此外，聚集信號表明樣品在去折疊狀態(tài)的聚集傾向，是生物制劑長期穩(wěn)定性的重要參數(shù)。

      PR NT.48 利用背向反射光學(xué)原理檢測蛋白的聚集。光穿過載有目標(biāo)蛋白的毛細(xì)管。如果沒有發(fā)生蛋白聚集，所有入射光穿過毛細(xì)管并被毛細(xì)管托盤反射，監(jiān)測到的信號由檢測器定量；如果蛋白樣品含有聚集顆粒，入射光則被散射。通過檢測損失掉的光信號，蛋白樣品的聚集得以精確測定。
化學(xué)變性和熱變性
 

      熱變性和化學(xué)變性廣泛應(yīng)用于量化蛋白結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。熱變性是監(jiān)測在持續(xù)穩(wěn)定升溫條件下蛋白構(gòu)象隨時(shí)間的變化，而化學(xué)變性則研究蛋白在變性劑作用下的去折疊過程。

      大多數(shù)蛋白的熱變性發(fā)生在一個(gè)較窄的溫度范圍內(nèi)。蛋白從折疊到去折疊轉(zhuǎn)變過程的中點(diǎn)被稱為熔融溫度，即Tm值。它是衡量蛋白穩(wěn)定性的一個(gè)重要參數(shù)。熱變性實(shí)驗(yàn)可對大量樣品快速平行進(jìn)行，因而特別適用于蛋白工程、制劑開發(fā)和篩選等研究。

      除了熱變性實(shí)驗(yàn)之外，類似的去折疊曲線也可以通過化學(xué)變性測試獲得，進(jìn)而反映蛋白折疊和去折疊過程中的熱力學(xué)參數(shù)和平衡信息。

內(nèi)源熒光檢測去折疊

      蛋白中色氨酸和酪氨酸熒光受其所在微環(huán)境的影響很大，尤其是色氨酸熒光，蛋白結(jié)構(gòu)的變化通常會影響其強(qiáng)度和發(fā)射波長。PR NT.48 儀器配備的熒光檢測器可測定樣品在兩種波長（350 nm 和 330 nm）下的熒光強(qiáng)度，因而可以靈敏的檢測到蛋白去折疊過程中熒光強(qiáng)度和熒光峰值的變化。

      通過變性曲線可以得到蛋白穩(wěn)定性的重要參數(shù)。衡量目標(biāo)蛋白的熱穩(wěn)定性可通過參數(shù)熔融溫度（Tm），即一半蛋白去折疊時(shí)的溫度。Tm值可根據(jù)色氨酸單熒光強(qiáng)度變化計(jì)算，也可以通過色氨酸在 330nm 和 350nm 發(fā)散波長下熒光比值計(jì)算。

      通過 F350 / F330 比值所獲得的數(shù)據(jù)通常可以清晰的描述蛋白去折疊的轉(zhuǎn)變過程，但有時(shí)單波長的檢測數(shù)據(jù)并不能導(dǎo)出 Tm 值，而 PR NT.48 雙波長檢測系統(tǒng)則可以靈敏檢測蛋白的去折疊過程。

技術(shù)特征

1. 天然的 DSF – 無需染料，可在任意緩沖液和去垢液中進(jìn)行測試

2. 超高分辨率：每3秒鐘可測試48根毛細(xì)管

3. 同時(shí)檢測蛋白去折疊和聚集情況

4. 檢測范圍廣泛：蛋白濃度從5 μg/ml 到 > 250 mg/ml

5. 溫度范圍：從15°C到 95°C

6. 熱變性和化學(xué)變性