MST助力分子間相互作用分析

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在生命科學(xué)領(lǐng)域中，生物分子間的相互作用具有非常重要的作用。通過對(duì)分子間相互作用分析，不僅可闡明細(xì)胞生物學(xué)事件，而且為疾病發(fā)生機(jī)制和藥物發(fā)現(xiàn)提供基礎(chǔ)。微量熱泳動(dòng)（microscale thermophoresis,MST）是一種分析生物分子相互作用的技術(shù)。

MST技術(shù)是一種基于檢測(cè)在溫度梯度中的生物分子電泳遷移率的變化而檢測(cè)生物分子間結(jié)合、解離過程，獲取分子間相互作用的模式和動(dòng)力學(xué)常數(shù)等方面信息的新技術(shù)，是近年來發(fā)展的研究生物分子相互作用的強(qiáng)有力工具，已廣泛應(yīng)用于藥物篩選、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、分子檢測(cè)和醫(yī)學(xué)診斷等生命科學(xué)領(lǐng)域。

MST原理

MST是一種表征生物分子特性的光學(xué)方法，是粒子在微觀溫度梯度中的定向運(yùn)動(dòng)。將其中一個(gè)互作分子(大多是蛋白)標(biāo)記熒光染料或者融合GFP標(biāo)簽，將標(biāo)記蛋白和配體分子按照特定的濃度梯度置于毛細(xì)管中，紅外激光加熱產(chǎn)生一個(gè)微觀的溫度梯度場(chǎng)發(fā)生熱泳動(dòng)，其水化層、分子大小、電荷等分子性質(zhì)會(huì)隨著熱泳動(dòng)發(fā)生改變，進(jìn)而引起反應(yīng)體系中熒光分布的變化。

MST特點(diǎn)

①檢測(cè)下限低，弱分子力首選；

②需固定樣品，且樣品用量較小，ug級(jí)別就能開展檢測(cè)；

③無需使用抗體，無需獲得高純度蛋白，直接使用Tris-NTA dye標(biāo)記His-Tag融合蛋白，即可上機(jī)進(jìn)行檢測(cè)；

④能夠測(cè)量復(fù)雜生物溶液（細(xì)胞裂解物、血清、洗滌劑、脂質(zhì)體等）；

⑤相互作用物尺寸范圍廣；

⑥不僅能定性兩個(gè)生物分子的互作關(guān)系，還可以定量判斷結(jié)合的親和力強(qiáng)弱。

MST應(yīng)用范圍

1、蛋白-小分子相互作用分析（蛋白酶與抑制劑、細(xì)胞膜蛋白活性）

2、蛋白-蛋白相互作用分析（包括抗原-抗體、分子伴侶-底物）

3、蛋白-肽相互作用分析

4、肽-肽相互作用分析

5、蛋白-核酸相互作用分析

6、核酸-核酸相互作用分析

7、核酸適配子-小分子相互作用分析

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